Т. Д. Измайлова, С. В. Петричук,
В. А. Агейкин, Е. Ю. Кузнецова
Кафедра
детских болезней лечебного факультета РГМУ,
Лаборатория
цитохимии НЦЗД, Москва.
Вестник Нижегородского
государственного университета им. Н. И. Лобачевского. Серия Биология. Вып. 2(4). Миллиметровые волны в биологии и медицине. Н.
Новгород: Изд-во ННГУ, 2001, с. 127-132
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
С целью изучения процессов адаптации у детей грудного возраста с постгипоксической энцефалопатией, проведено клинико-лабораторное обследование 28 детей, включавшее клинический осмотр, биохимический анализ крови с определением уровня тиреотропного гормона, свободного тироксина, кортизола и цитохимический анализ крови с определением активности ферментов - сукцинатдегидрогеназы, α-глицерофос-фатдегидрогеназы, кислой фосфатазы в лимфоцитах периферической крови. Выявлено, что у детей с перинатальным гипоксическим поражением ЦНС отмечается срыв процессов адаптации, заключающейся в снижении функциональной активности щитовидной железы и надпочечников, нарушении энергетического метаболизма клетки. В качестве адаптогенной терапии использован метод КВЧ терапии. Применение данного метода позволяет достигать лёгкого седативного эффекта у детей с синдромом повышенной нервно-рефлекторной возбудимости. При лабораторном контроле отмечается формирование устойчивого состояния энергетики клетки, что является подтверждением положительного влияния КВЧ терапии на субклеточном уровне.
Известно, что организм человека - сложная иерархическая система, состоящая из клеточных структур,
образующих целостный организм. В то же время отдельный клеточный пул или клетку
можно рассматривать как самостоятельную открытую систему. Изменения, происходящие
на данном иерархическом уровне, не всегда реализуются в виде заболевания, но
снижают резервные возможности организма. Снижение резервных возможностей
организма клинически проявляется неспособностью организма адекватно ответить на
внешнее воздействие, что можно определить как изменение реактивности. Исходное
состояние клетки (резервные возможности) определяют её ответ на действие внешнего патологического фактора. Со
снижением резервных возможностей клетки повышается вероятность её гибели и развитие
болезни.
Человек постоянно
подвергается воздействию внешней среды. Реакция организма, на первоначальное
воздействие определяет различные изменения, при которых в организме либо
восстанавливается исходное состояние, либо развивается фаза истощения с гибелью
адренокортикоцитов. В зависимости от интенсивности подобных изменений
клинические проявления будут варьировать от симптомов надпочечниковой
недостаточности разной степени тяжести до субклинического
гипокортицизма, проявляющегося снижением сопротивляемости
организма [1].
При изучении адаптационных
реакций организма, большое внимание уделяется не только взаимодействию основных
регуляторных систем - нервной и эндокринной в процессе формирования этих
реакций, но и их проявлению на митохондриальном
уровне в отдельной клетке [2-4].
Целью настоящей работы
явилось изучение состояния адаптации детей грудного возраста с
постгипоксическими изменениями ЦНС и обоснование
коррекции выявленных нарушений.
Проведено клиническое обследование
28-и детей в возрасте от 1 до 5 месяцев, с различными синдромами
постгипоксической энцефалопатии (мышечная дистония, повышение
нервно-рефлекторной возбудимости, гипертензионно-гидроцефальный синдром разной
степени тяжести, вегето-висцеральные дисфункции) (табл.1).
Лабораторная часть исследования включала определение
уровня гормонов: тиреотропный гормон (ТТГ), свободный
тироксин, кортизол (исследование проводилось иммуноферментным методом, наборы
фирмы Alcor bio).
Для оценки реакций, реализующихся на клеточном уровне, был применён клинический
цитохимический метод. Данный метод позволяет количественно определить
активность дегидрогеназ в клетках крови, и судить об энергетическом метаболизме
клетки [5,6].
Таблица
1
Клиническая характеристика обследованных детей (n=28)
Название синдрома
|
Кол-во детей с данным синдромом |
Синдром повышения
нервно-рефлекторной возбудимости |
23 |
Синдром мышечной дистонии гипертонус гипотония |
28 24 4 |
Гипертензионно-гидроцефальный синдром |
21 |
Синдром вегето-висцеральных
дисфункций (пилороспазм) |
7 |
Синдром угнетения ЦНС |
2 |
В анализе учитывается не только среднее значение энзиматической активности, но и параметры распределения клеток в клеточной популяции.
Коэффициент вариации - степень разнородности клеток по активности фермента,
коэффициент асимметрии - степень уравновешенности пулов клеток с высокой и
низкой активностью фермента, коэффициент эксцесса - резерв клеток с типичной активностью фермента.
В качестве морфологического субстрата исследования выбран лимфоцит, как
наиболее доступная клетка, с высокой степенью достоверности отражающая
энергетические процессы, происходящие в других тканях и органах [7-9]. При
цитохимической экспертизе определяются три фермента - сукцинатдегидрогеназа
(СДГ), α-глицерофосфатдегидрогеназа
(α-ГФДГ), кислая фосфатаза (КФ). Для изучения процессов адаптации на субклеточном уровне
был использован цитоморфометрический анализ (анализатор изображения фирмы
«Диаморф», программное обеспечение проф. А. В. Жукоцкого, и к.м.н. Н. И.
Якубовой), позволяющий оценить функциональную активность митохондрий по
количеству продукта реакции при выявлении активности СДГ.
Всем двадцати восьми детям было проведено
цитохимическое исследование лимфоцитов периферической крови. Двадцати двум
детям было проведено исследование гормонального статуса с определением
уровня тиреотропного гормона (ТТГ),
свободного тироксина (Т4своб.), кортизола. Двадцать два ребёнка получали
лечение в условиях стационара, причём 8 детей получали только базовую
медикаментозную терапию по поводу постгипоксической
энцефалопатии, 14 детей получали комплексное лечение, включающее базовую
медикаментозную терапию и применение крайне высоких частот (КВЧ) низкой
мощности на биологически активные точки: VG-19, VC-12, E-36.
Согласно
гипотезе Н. Д. Девяткова, при нарушении функции клетки меняются частотные характеристики её излучения. Аппарат КВЧ
моделирует собственное излучение организма и выполняет функцию
синхронизирующего устройства, восстанавливая физиологические частотные
характеристики излучения, утраченные во время болезни [10].
Нами применялся аппарат КВЧ с шумовым излучением "Амфит – 0,2/10 – 0,1" производства ООО
"ФизТех" Нижегородского госуниверситета в лечении 14-ти детей вместе
с базовой медикаментозной терапией по поводу постгипоксической энцефалопатии.
Группу сравнения составили 8 детей, получавших только базовую терапию. Оценка
результатов лечения проводилась на основании клинических проявлений заболевания
и цитохимического анализа крови через 8 дней от начала лечения. Четырём детям,
получавшим комплексное лечение, проводился анализ изображения 20-ти клеток с
определением функциональной активности митохондрий через 40 минут после первой
КВЧ процедуры.
Результаты наших исследований показали, что у детей с
постгипоксической энцефалопатией отмечается
снижение функциональной активности коры надпочечников и угнетение функции
щитовидной железы (табл.2), (Рис. 1). Резкое изменение энергетического
метаболизма клетки, заключающееся в активации сукцинатдегидрогеназы, снижении
активности α-глицерофос-фатдегидрогеназы,
повышении активности кислой фосфатазы (табл.3).
Таблица 2
Гормональный статус у детей с постгипоксической
энцефалопатией
Гормоны
|
Значения
(M±m), (n=22) |
Норма |
ТТГ |
3,37±0,37мкМЕ/мл |
0,26±0,16 мкМЕ/мл |
Т4 своб. |
14,62±0,49 нмоль/л |
23,42±1,03 нмоль/л* |
кортизол |
124,98±23,96 нмоль/л |
495,8 ±31,6 нмоль/л* |
*-различие
между группами достоверно P<0.01.
Рис.1. Уровень кортизола у
детей с постгипатическими изменениями ЦНС
Перечисленные изменения свидетельствуют о неустойчивом
равновесии внутренней среды организма ребёнка, что повышает возможность
развития патологического процесса в ответ на любое внешнее воздействие.
На фоне проведения КВЧ терапии
наибольшая клиническая динамика отмечалась в отношении синдрома повышенной
нервно-рефлекторной возбудимости, заключавшаяся в улучшении сна, более быстром
купировании таких симптомов, как тремор рук и подбородка, спонтанный рефлекс
Моро.
Таблица
3
Ферментный статус лимфоцитов у детей с постгипоксической
энцефалопатией
Цитохимический параметр |
Дети с постгипоксическим
поражением ЦНС до лечения, (n=28) |
Дети, получавшие базовую терапию
(через 8 дней лечения), (n=8) |
Дети, получавшие комплексное
лечение (через 8 дней лечения), (n=10) |
Дети первой группы здоровья |
Сукцинатдегидрогеназа
|
|
|
|
|
Средняя активность в популяции |
24,68±0,93* |
25,79±1,61 |
27,61±1,71 |
20,11±0,75 |
Коэффициент асимметрии |
0,61±0,10 |
0,61±0,18 |
0,35±0,09 |
1,03±0,59 |
Коэффициент эксцесса |
0,24±0,24 |
-0,19±0,38 |
-0,58±0,21 |
0,12±0,25 |
Коэффициент вариаци±±и |
25,43±0,70 |
27,49±1,51 |
24,08±1,43 |
27,61±1,6 |
Коэф. относительной энтропии информации |
0,770±0,012 |
0,803±0,014 |
0,790±0,02 |
0,763±0,004 |
Α-глицерофосфатдегидрогеназа
|
|
|
|
|
Средняя активность в популяции |
4,33±0,42* |
3,75±0,52 |
2,92±0,56 |
14,35±1,45 |
Коэффициент асимметрии |
0,74±0,09 |
0,79±0,16 |
0,58±0,23 |
0,41±0,27 |
Коэффициент эксцесса |
0,22±0,24 |
0,14±0,27 |
-0,38±0,23 |
0,05±0,18 |
Коэффициент вариации |
67,02±4,71* |
80,12±12,16 |
71,27±10,55 |
31,80±1,90 |
Коэф. относительной энтропии информации |
0,610±0,014* |
0,579±0,02 |
0,538±0,031 |
0,733±0,020 |
кислая фосфатаза
|
|
|
|
|
Процент энзим-положительных лимфоцитов |
74,04±3,07 |
76,01±2,31 |
79,5±2,38 |
71,7±2,9 |
* - Р<0.01
по сравнению со здоровыми детьми.
Анализ лабораторных показателей выявил,
что воздействие ЭМИ КВЧ диапазона вызывает в организме изменения, максимально
проявляющиеся на субклеточном уровне. Через 40 минут после первой КВЧ процедуры
происходит изменение состояния клетки по всем цитоморфометрическим
показателям на величину от 10% до 57%. Уменьшается общее количество депозитов и повышается их
оптическая плотность, уменьшается количество отдельно лежащих депозитов и
увеличивается их площадь (табл.4), (Рис. 2, 3).
Рис. 2. Изменение площади
отдельно лежащих гранул на фоне КВЧ процедуры
Таблица 4
Динамика цитоморфометрических
показателей через 40 мин. после первой КВЧ процедуры
Параметры |
Значение до
процедуры
(М±m), (n=80) |
Значение
через 40 мин. после процедуры (M±m), (n=80) |
Все
депозиты
|
|
|
AAN-число |
12,43±0,5* |
10,85±0,53 |
AA-площадь |
145,5±7,3 |
162,9±10,2 |
AP-периметр |
59,2±2,6 |
64,6±3,6 |
AO-оптич. плотн. |
19,38±0,34 |
20,22±0,41 |
AI-интегральн.
оптич. плотн. |
3275±199 |
3789±290 |
Отдельно
лежащие депозиты
|
|
|
CAN-число |
10,51±0,5* |
9,11±0,5 |
CA-площадь |
141,3±8,9* |
172,9±12,5 |
CP-периметр |
57,1±3,2 |
67,7±5,1 |
CO-оптич. плотн. |
17,3±0,2 |
17,8±0,3 |
CI-интегральн.
оптич. плотн. |
2965±221 |
3743±365 |
Кластеры (объединения депозитов) |
|
|
GAN-число депозитов |
3,5±0,2 |
3,1±0,2 |
GA-площадь |
151,0±22,0 |
135,2±15,4 |
GO-оптич. плотн. |
29,9±0,72 |
30,8±0,86 |
*-различие
достоверно Р<0,05
Подобные изменения свидетельствуют
о повышении активности митохондрий при хорошей сбалансированности их функции
энергетического обеспечения клетки.
Рис.3. Изменение
коэффициента вариации интегральной оптической площади
на
фоне КВЧ процедуры.
1.
У детей с клинической симптоматикой постгипоксической энцефалопатии отмечается
снижение функциональной активности коры надпочечников и щитовидной железы,
резкое изменение энергетического метаболизма клеток в виде повышения активности
сукцинатдегидрогеназы, снижения активности α-глицерофосфатдегидрогеназы,
повышения уровня КФ, что свидетельствует о неустойчивости равновесия гомеостаза
и срыве процессов адаптации.
2. Воздействие
электромагнитным излучением
миллиметрового диапазона (КВЧ), позволяет достичь лёгкого седативного
эффекта и сбалансировать энергетический метаболизм клетки, что обусловливает
целесообразность более широкого применения этого метода в комплексном лечении
детей с постгипоксическими изменениями ЦНС.
1. Рыжавский Б. Я. Постнатальный онтогенез коркового
вещества надпочечников. Новосибирск, Наука. Сибирское отделение. 1989.
2. Горизонтов П. Д., Протасова Т. Н. Роль АКТГ и кортикостероидов в
патологии. М., Медицина. 1968.
3. Деркачёв Э. Ф., Кондрашова М. Н.,
Маевский Е. И.
Прорастание до митохондриального уровня нитей
кортикостероидной регуляции. //Регуляция энергетического обмена и
физиологическое состояние организма: Сборник научных трудов. М., Наука. 1978.
С. 116 – 122.
4. Меерсон Ф. З. Адаптация, стресс и профилактика.
М., Наука. 1981.
5. Нарциссов Р. П. Диагностическая и прогностическая
ценность цитохимического определения дегидрогеназ
лимфоцитов. //Вестник АМН СССР. 1978. С. 71 – 74.
6. Нарциссов Р. П. Применение n-нитротетразолия
фиолетового для количественного цитохимического определения дегидрогеназ
лимфоцитов человека. //Архив анатомии. 1969. № 5. С. 85 – 91.
7. Атаханов Ш. Э., Духова З. Н., Катосова Л. К. Корреляция активности дегидрогеназ
лимфоцитов и внутренних органов. //Медицинский журнал Узбекистана. 1982. № 5.
С. 63 – 68.
8. Духова З. Н., Кузьминов О. Д. Влияние внутривенного гексеналового наркоза на активность ферментов лейкоцитов и
различных органов в эксперименте. //Актуальные вопросы клинической медицины,
гигиены труда и организации здравоохранения: Тезисы докладов. 1972. С. 19.
9. Суслова Г. Ф. Динамика некоторых систем лимфоцитов
и органов в условиях нормального развития и патологии: Автореф.
дис. … канд. биол. н. М., 1975.
10. Бецкий
О. В., Девятков Н. Д., Кислов В. В. Миллиметровые волны низкой
интенсивности в медицине и биологии. //Зарубежная радиоэлектроника. 1996. №12.
С. 3 – 15.